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贴息贷款添什么?XevoTQAbsolute给你信心

2022-11-24科学

介绍完离子淌度和原位分子成像质谱这些独特的高分辨质谱技术,小编今天带来在这次「贴息贷款」项目中出现频率颇高的三重四极杆质谱系列文章!作为质谱定量的平台技术,三重四极杆质谱已经在科研领域有着广泛的应用。

但是,小编深深理解科研工作者对灵敏度和定量限的追求没有止境!诚邀您走进沃特世生物分析新技术交流会现场或直播间,近距离观摩沃特世最新推出的Xevo TQ Absolute,与工程师们一起探讨这款拥有强大性能的仪器可以赋予您科研发现怎样的强大力量吧!(等不及的朋友可以直接下拉至文末扫码预约报名沃特世生物分析新技术专场交流)!

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生命科学研究— 助力发现新调控表观遗传的代谢物分子ITA

衣康酸(Itaconate, ITA)是近年来在巨噬细胞中发现的具有显著抗炎活性的小分子代谢物。之前很多学者的研究并未阐明ITA如何实现对众多炎症基因的转录调控。该调控是否与表观遗传修饰相关,其功能靶点是什么?都是亟待探索的科学问题。复旦大学生物医学研究院叶丹课题组在【Nature Cell Biology】杂志上发表研究论文,首次报道ITA是新的调控表观遗传的代谢物分子。发现ITA通过与α-酮戊二酸(α-KG)竞争结合的方式,抑制DNA双加氧酶TET和调控炎症基因表达,并证实TET2是衣康酸抗炎的重要功能靶标。

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图1. Irg1缺陷小鼠更容易发生LPS诱导的急性肺损伤和死亡。



仪器运用亮点:

文中恰到好处地运用LC-MS /MS来实现细胞内代谢物的定量,并使用自动细胞计数器测量细胞数量和直径。通过添加c13标记的ITA作为内标,细胞立即加入1 ml 80% (vol/vol)冷冻(−80°C)甲醇固定,使用ACQUITY UPLC I- class超高效液相色谱仪Xevo TQ-XS串联三重四极杆质谱仪分析细胞提取物。文章假设细胞呈球形,考虑细胞直径(d,μm)和细胞数量,使用外部标准曲线计算细胞内代谢物浓度,公式如下:[代谢物]=(代谢物量(摩尔))÷ (((4/ 3000)π(d÷2)3)细胞数)。数据分析使用MassLynx v4.2

环境研究— 环境暴露对两种鲑鱼兽药代谢水平影响

不同自然环境暴露对生物的影响,是近年来环境和动植物研究领域广泛关注的问题。来自智利大学的研究人员对比了海水育肥阶段的不同鲑鱼养殖场中七个实验单元的虹鳟(Oncorhynchus mykiss)和大西洋鲑鱼(Salmo salar),通过估算土霉素(OTC)的停药时间(WT)来评价兽药代谢水平。

所有选定的鱼都用两种不同的商业OTC单剂量进行模拟治疗,在一定时间后使用Waters Xevo TQ-S micro三重四极杆液质联用仪进行样品分析。分析方法经过优化后可用于相关的数据评价,对线性、回收率和精密度进行了内部验证。包括检测限(LOD)和定量限(LOQ)的数据完全满足VICH GL49指南计算检测范围。

根据一定时间后兽药残留物消耗研究中获得的数据,大多数采样笼子的浓度允许兽药满足于最大残留限量(MRL)值为200 μg/kg的要求,但不满足于MRL为10 μg/kg的要求。由此考虑到最大残留限量的要求,给虹鳟和大西洋鲑鱼的估算出了较为明确的退捕时间,从而保护消费者健康。

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图2. LNC(浓度为自然对数)、DD(度日)、处理(土霉素20%和30%)、物种(虹鳟、大西洋鲑鱼)、采样点和DPT(处理后天数)的显著相关系数矩阵。

仪器运用亮点:

三重四极杆质谱是痕量化合物定量的金标准。在本实验中,兽药残留水平需要在长达一年多的时间内持续检测,数据质量将会对实验的完成程度产生重要影响。这就需要仪器在较高水平下长时间稳定运转。

由于鱼肉基质复杂,Waters Xevo TQ-S micro三重四极杆液质联用仪自身灵敏度未受到鱼肉基质的明显干扰,长期运转的前提下仍然满足相关法规及置信区间的灵敏度要求,这为本实验提供了稳定的条件保障。

新药研发— 小分子药物代谢动力学研究

双黄莲水提液(SHL)在临床广泛用于治疗上呼吸道感染,但是其抗病毒作用机理尚不明确。本研究结果表明SHL给药后通过提高肺指数,下调细胞因子(TNF-α,IL-1β,IL-6)可以显著提高感染H1N1小鼠的生存率和生存天数。利用ACQUITY UPLC-Xevo TQ-XS三重四极杆质谱分析SHL给药后体内多组分药代动力学行为,研究发现5种化合物(黄芩苷、当药苷、氯原酸、连翘酯苷A和连翘苷)表现出令人满意的药代动力学特征,推测为主要药理活性成分,进一步的实验也验证了该假说。更深入的药理学分子网络分析表明SHL可能通过介导TNF-信号通路发挥抗病毒作用。

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图3. SHL治疗流感的物质基础和抗病毒机理。

仪器运用亮点:

利用ACQUITY UPLC-Xevo TQ-XS快速正负极切换和多通道MRM分析能力对治疗剂量SHL给药后多组分药代动力学行为开展研究,获得了完整的SHL代谢信息。

生物药研究— 抗体药物代谢动力学研究

最近在蛋白质捕获和质谱技术方面的进步使完整分子量检测并同时定量给药生物疗法成为可能。样品分析的监管要求中包括生物分析方法验证,以确定活体研究样品的药物浓度。本研究对一个完整蛋白质LC-MS检测法进行了模拟生物分析方法验证,同时,未知样品在LC-MS(多肽LC-MS/MS三重四极杆质谱)和已建立的生物分析检测方法(LBAs)之间进行了定量方法的比较。在不同监测方法的相关定量数据分析中,活体样品中测得的浓度是一致的。文中,完整蛋白质LC-MS使用了Waters Xevo G2-XS Q-TOF技术,多肽定量LC-MS使用的是Waters Xevo TQ-XS三重四极杆质谱技术,前者可以在完整抗体的层面上同时进行定性及定量的分析,后者可以基于特征性肽段,对抗体及其代谢产物进行定量监测分析,且线性范围及精确度大于前者。

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图4. 浓度-时间曲线:Immunoassay (ligand-binding assay) peptide LC–MS/MS与intact LC–MS assays。


仪器运用亮点:

利用UPLC Peptide BEH C18柱在UPLC平台上分离肽段,并通过Waters TQ-S三重四极杆质谱的MRM定量分析特征性肽段,可以对活体样本中的抗体浓度进行精确定量,并和ELISA法具有较高一致性和相当的线性范围。

相对于ELISA实验,三重四极杆质谱的反应步骤更少且无需依赖带标记的检测二抗,与ELISA技术形成良好的互为验证手段。

新疗法药物研究— 寡核苷酸的高灵敏度LC-MS/MS生物分析定量

寡核苷酸成为一种难以测量的底物是由多种因素导致的,包括但不限于:需要离子对或非反相色谱;需要精细的处理和样品制备;经常与耗材发生非特异性结合并且经常与色谱系统中存在的金属表面相互作用等。本研究定量分析了寡聚脱氧胸苷标准品

(Waters MassPREP寡核苷酸分离技术(OST)标准品)和全硫代反义寡核苷酸GEM91 [d(P-Thio)(C-T-C-T-C-G-C-A-C-C-C-A-T-C-T-C-T-C-T-C-C-T-T-C-T)-DNA],展示了高性能Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪Waters ACQUITY Premier联用系统分析生物基质中寡核苷酸的性能。在分析人血浆中的反义寡核苷酸和寡核苷酸性能标准品时,均观察到低至ng/ml水平的灵敏度和良好的动态范围性能。

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图5. A.GEM 91 (597.2>319.1) 0.1 ng/mL标准品(LLOQ)与空白基质(绿色痕迹)的叠加图;图5B.GEM91 QC样品(0.1–500 ng/mL)的代表性迹线。

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图6. 不同通道检测0.1 ng/mL样品的能力。

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图7. 在Xevo TQ Absolute上分析GEM 91获得的标准曲线,显示5x线性动态范围,插图所示为0.1-10 ng/mL标准品的放大图。


仪器运用亮点:

Xevo TQ Absolute对棘手的负电离化合物具有超高的灵敏度,能够为基于液相色谱/质谱联用法(LC-MS/MS)定量生物基质中寡核苷酸的常规应用生成高质量数据。

分离系统和分析柱均使用搭载MaxPeak高性能表面(HPS)技术ACQUITY Premier,有助于缓解金属吸附,保证在定量生物分析中获得稳定、高灵敏度的定量性能。

要在分析棘手的化合物时也能达到更低的定量限并满足法规要求,您需要一台性能出色的仪器。Xevo TQ Absolute在分析棘手的化合物时,灵敏度可达到既往产品的15倍,让您能够做出可靠决定。

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图8. Xevo TQ Absolute显著提高了灵敏度,特别是对于负离子化合物。